暗场显微镜的原理及使用方法
暗场显微镜的原理及应用
暗场显微镜技术是利用斜射照明法阻挡透过标本细节的直射光，以反射光和衍射光来观察标本。在普通显微镜下直射光透过标本的时候，一部分光被吸收，另一部分光透射或折射，形成标本细节内部结构的真实投影。因此，在普通显微镜下所看到的是物体形态和结构。而在暗场显微镜下从侧面照射到物体的光束，绕射或反射造成物体外形的侧影。因此暗场显微镜下所看到的只是物体的轮廓或物体的运动。普通显微镜下可以看到0.45um的细节，而暗场显微镜下竟能看到0.2-0.004um的极徽小物体。这个范围的物体叫亚粒子,因此暗场显微镜也可以称裂隙限外显微镜。暗场显微镜特别适用于胶体化学领域中观察溶质粒子的布朗运动，适用于观察原虫、细菌的鞭毛、伪足运动，医学检验学范围适用于观察人体体液中螺旋体、尿管形、结晶或各种粒子.在这一点上，暗场显微镜远比其他种类显微镜要优越得多。
暗场显微镜的使用方法
暗场观察时不能使用油浸系或水浸系物镜，而用干燥系物镜中镜口率在0.85以下的物镜。假如使用镜口率过大的物镜时，除微粒子反射的光束以外的旁射光束也可进入物镜前透镜.就是这种放大率并不大的物镜下，可以达到观察亚微粒子的要求。Zeiss公司出售的带有孔栏的物镜最适合于此种用途。具体操作如下。
1.安装暗场聚光器检查聚光器的光轴(并非晶体光轴而指几何光学光轴)是否与显微镜的光路一致。聚光镜用中心调节旋钮合轴调整之后，圈锥光束的交点集中到标本平面上。
2.放标本放置标本时在聚光镜前透镜与载物片之间必须浸油。否则来自标本细节的反射光和衍射光束在载物玻片表面进行全反射。观察结果趋于失败。
3.调节聚光镜焦点操纵光源会聚透镜务使圆锥形光束的交点照射到标本平面上。
4.迭择物镜用于暗场观察的物镜中.油浸系或水浸系的物镜不能使用。就是干燥系物镜中也要挑选镜率在0.85以下为好。Zeiss厂出售的本身带有可调光栏的物镜最为适用。如果物镜镜口率过大时，来自聚光镜的部分直射光束进入物镜前透镜，从而干扰暗视野成像效应。如果使用油浸系物镜观察时，必须调节物镜内装孔径光栏。
5.光派的选择暗场显微镜中光能损失太大。因此必须选择光强最大的光源，才能取得较好效果。尤其以超聚光镜观察胶体微粒运动时，光强愈大愈好.
6.浸油的方法聚光镜与载玻片间浸油时特别注意是否有气泡。气泡可招致暗视野观察效果的完全破坏。
